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点击次数：1766 发布时间：2018/9/18 15:20:33
信帆生物分享：台盼蓝染色法的原理及操作步骤
台盼蓝染液是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以检测细胞是否存活。
台盼蓝染色法的原理
正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中*常用的死细胞鉴定染色方法。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
台盼蓝染色法的操作步骤
材料：
1、显微镜、玻片、盖玻片、滴管；
2、试剂：0.4%台盼蓝染液；
3、台盼蓝（Trypan blue）：0.4g；
4、生理盐水：100ml；
操作步骤：
1、用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液；
2、用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液来消化培养的贴壁细胞；
3、再加入适量Hanks液制成细胞悬液；
4、将待染色细胞稀释至所需浓度（方法及浓度范围与细胞计数相同）；
5、每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴，室温下染3—5min；
6、染色过的细胞材料，取一滴细胞悬液置玻片上，加盖玻片后放高倍镜下观察；
7、死亡的细胞着浅蓝色并膨大，无光泽。活细胞不着色并保持正常形态，有光泽；
8、计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目；
9、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。
（细胞活率（%）=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。）
台盼蓝染色法注意事项：
1、染色时间不能太长，否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色，使监测结果偏低。
2、另可结合细胞计数方法，同时进行细胞计数和活力检测。
3、有潜在致癌危险，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
台盼蓝（Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝，是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性与细胞的存活率，是组织和细胞培养中*常用的死细胞鉴定染色方法。
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