超好用的基质金属蛋白酶(MMP)明胶酶谱法电泳分析试剂盒(MMP2/9)

点击次数：877 发布时间：2018/7/5 9:40:25

超好用的基质金属蛋白酶(MMP)明胶酶谱法电泳分析试剂盒(MMP2/9)！

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文章标题《绿茶多酚EGCG增强动脉粥样硬化斑块稳定性及其相关机制研究》

上海信帆生物供应明胶酶谱法试剂盒，可检测MMP2和MMP9的活性，检测样本适用于血清，细胞，细胞培养液等，欢迎大家来电咨询订购！

明胶酶谱法试剂盒

描述：基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以无活性的酶原形式分泌，活化后能够降解细胞外基质的胶原蛋白，又称胶原酶。通过影响细胞外基质，胶原酶参与胚胎发育、形态发生、组织重塑等过程，并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的 MMP-2、MMP-9 参与各种生理与病理过程，其在临床诊断和治疗中的意义日益受到重视。

本试剂盒采用酶谱法(zymography)检测 MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一种广为使用的、基于 SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达 1 nM，高于 ELISA 方法 2，其基本原理和程序是：制备加有胶原酶底物的 SDS-PAGE 凝胶，含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳，电泳结束后取出凝胶与酶反应 Buffer 孵育，凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示 MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。

超好用的基质金属蛋白酶(MMP)明胶酶谱法电泳分析试剂盒(MMP2/9)

本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至 0.1~0.5 µl 血液中的 MMP-2、MMP- 9 酶谱及活性，检测灵敏度~1 nM。试剂盒可进行 50 次标准小胶检测，如果小胶加样孔为 10~15个，则总计可检测 500~750 个样品。

检测步骤：

1. 制备含 MMP 底物蛋白的 SDS-PAGE 凝胶：推荐分离胶浓度为 8%。按照标准程序制备 SDS- PAGE 凝胶。将 10 × substrate G 融化，并 90 ºC 加热 5 分钟。分别在浓缩胶和分离胶中额外加入 10 × substrate G 并使之稀释 10 倍，混匀后加入过硫酸铵和 TEMED，等待凝胶聚合。

2. 待测样品 1:1 稀释于 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer (用完后可自行配制：4% SDS, 100 mM Tris-Cl pH6.8, 20% glycerol, 0.02% bromophnol blue)，混合后直接上样。切勿加热变性，并且仅使用不加还原剂的上样缓冲液。可通过预试验确定加样量，使用普通蛋白预染 Marker 即可。阳性对照(可选步骤)：可取人、小鼠、大鼠或兔 100µl 全血与 100µl 2 × SDS-PAGE non-

reducing buffer 等体积混合，取 5-15µl 上样。

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