超好用的人外周血T细胞亚群检测试剂盒

点击次数：9700 发布时间：2018/12/6 10:16:16

超好用的人外周血T细胞亚群检测试剂盒

如果您想了解更多关于人外周血T细胞亚群检测试剂盒的详细信息，欢迎联系上海信帆生物科技有限公司。

规　　格：

100人份

试剂盒内容：

1	防脱片剂	2ml
2	固定液	10ml
3	A小鼠抗人CD3单抗	1ml
	B小鼠抗人CD4单抗	1ml
	C小鼠抗人CD8单抗	1ml
4	生物素标记羊抗小鼠IgG（ IgG/Bio）	1.5ml × 2
5	碱性磷酸酶标记链霉卵白素(S-A/AP)	1.5ml × 2
6	A底物增强剂（ 40×)	200μl
	B底物液（ 40× )	200μl
	C底物缓冲液（ 10× )	800μl
7	细胞核复染液	5ml
8	封片剂	1ml
9	记号笔	1支
10	PBS	2包(1000ml)

标本染色：

1. 充分干燥（室温2小时以上或过夜）的细胞涂片先用记号笔在标本外画圈，然后滴加固定液50μl，室温静置2-3分钟，用PBS淋洗，擦干玻片背面及细胞外的PBS。
*以下反应均需在湿盒中进行。
2. 分别滴加抗人CD3、CD4、CD8单抗适量（10-30μl）， 4℃过夜，PBS淋洗3次。
3. 滴加生物素标记抗小鼠IgG适量（10-30μl），37℃孵育30-45分钟，PBS淋洗3次。
4. 滴加碱性磷酸酶标记链霉卵白素适量（10-30μl）37℃孵育30-45分钟，PBS淋洗3次。
5. 滴加显色剂30-50μl，室温显色20-40分钟。可在显微镜下观察，待细胞膜上出现红色标记物时，用PBS淋洗。
6. 滴加细胞核复染液30-50μl，30秒后自来水淋洗。
7. 滴加封片剂，盖片封片，镜检。如不需保存亦可用水替代封片剂盖片镜检。

标本制备：

取肝素抗凝（25μl/ml）的静脉血1~2ml，PBS稀释1-2倍后，沿装有等量淋巴细胞分离液的试管壁混匀缓慢加至液面上层，保持两种液体界面清晰，离心（2000转/分）15-20分钟，吸取两液面交界处的单个核细胞层，加5倍PBS，离心（1000转/分）5分钟，弃上清液，沉淀即为单个核细胞。利用试管中剩余的少许回流液体（约一滴）混匀细胞，制成单个核细胞悬液。滴30μl细胞悬液于载玻片上，静置2分钟使细胞下沉粘附于玻片上，吸去液体，快速吹干或37℃温箱1小时烤干。或用PBS将单个核细胞调至2×105个/ml，离心涂片机1000转离心1-2分钟制片，快速吹干或37℃温箱1小时烤干。涂片前取防脱片剂5-10μl均匀推片，亦可用棉签粘取防脱片剂均匀涂于干净玻片上，待干后制备细胞涂片，以防掉片。

观　　察：

高倍镜下选取染色好的视野记数100-200个单个核细胞，细胞表面有红色标记物为阳性细胞。算出阳性率。

正常参考值：

正常人外周血中，阳性细胞百分率一般在：CD3，60-80%；CD4，35-55%；CD8，20-30%；CD4/CD8的比值在1.5-2.0范围内。

原创作者：上海信帆生物科技有限公司