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肝素亲和填料使用方法

点击次数:234   发布时间:2024/6/27 9:46:21

 肝素亲和填料使用方法

Heparin NUPharose FF和 Heparin NUPharose HP是肝素亲和填料, 是经典的琼脂糖凝胶层析介质基球 NUPharose上键合 肝素 而成。 FF为 Fast Flow的缩写,具备快流速的特点,可用于快速纯化蛋白质,适用性广,易于放大。 HP为 High Performance的缩写,具备分辨率高的特点。 肝素亲和的原理较为复杂, 一般认为 肝素与蛋白的结合是离子相互作用、氢键与 范德华力 等多种驱动力共同作用的结果。 肝素填料 主要用于凝血酶 III、凝血因子、脂蛋白、酯酶、激素、干扰素等的分离纯化。 也有 文献报道将肝素填料用于外泌体的纯化。产品留了琼脂糖极好的亲 水性及大网架结构,与生物活性大分子有很好的相容性,具有载量高,非特异性吸附少,流速快等特点, 适用于各种肝素亲和层析。

使用方法 参考

1、色谱柱装填

以下阐述与层析系统连接时,填料的色谱柱装填方法。

1 所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液体做脱气处理。

2)填料 用量计算: 通过沉降定量填料体积, 需要的沉降 填料 体积 =柱体积× 压缩比(也称压缩因子) 。 沉降体积是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降 完全 读取的稳定体积。 Heparin NUPharose FF的压缩比为 ~1.15 Heparin NUPharose HP的压缩比为 ~1.20。为使达到装柱比,可通过柱头下压的方法,也可以通过高流速 压柱。

3)填料 清洗: 将 填料 悬液充分摇匀后量取 相应体积, 抽去液体,并用约 3倍填料体积的 纯化水洗涤,重复 3次 ,以除去保存液 。

4)装柱 填料 悬液准备:将 填料 转移 到 适当的容器中,加入 适量的装柱液, 制成50~75 v%的装柱 填料 悬液 原包装中填料体积 分数 为 使用前 搅匀。

5 装填 前准备: 在 清洗干净的层析柱 下端加入 装柱液 ,以除去 下垫片及层析柱下端 的空气,在柱内保留少量的蒸馏水 拧紧下堵头,调整柱子使其垂直于地面。

6 装填 将搅匀后的 填料 悬液一次性缓慢倒入层析柱内(必要时使用装柱器)为避免引 入气泡 ,应使之沿层析柱内壁自然流下 。 将所有填料加入后, 用装柱液将装柱器加满,拧紧装柱器上盖,将 柱子 与层析系统连接。

7)压柱:使柱内填料自然沉降(或 50~150 cm/h的 低 流速下沉降),待填料沉降完全后(填料与液体的界面清晰),去除 装柱器 装上上柱头, 并 将柱头下降至 界面 处通过 高 流速( 推荐流速见下表, 注意 柱压不超过 0.3 MPa 继续 压柱至 界面 清晰稳定,标记 界面 稳定时的柱高。 停泵,打开柱头上的阀门 /堵头,关闭柱底的阀门 /堵头,下压柱头至标记位置 下方与压缩比对应的位置 ,旋紧柱头,装柱完成。 装柱完成后,需 用高流速平衡柱内的填料 。

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