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点击次数：594 发布时间：2021/6/2 15:26:03
· 上 传 者： 上海信帆生物科技有限公司
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· 所属分类：应用方法
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· 资料简介： 蓝色荧光染色体核型分析试剂盒产品说明书 主要用途 蓝色荧光（DAPI）染色体核型分析试剂是一种旨在通过使用荧光染料 DAPI 与染色体 DNA 的结合并发出荧光 检测信号来显示染色体带型特征而构成细胞染色体核型的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功 实验证明的。该荧光分析是细胞遗传学中的*新研究技术。适用于各种生长中的动物或人体细胞。产品即到即 用，性能稳定，荧光清晰。 技术背景 作为细胞 DNA 染色剂的 4,6-二咪基－4-联苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole； DAPI）特异性地与 DNA 双螺旋的凹槽部分发生相互作用，从而与 DNA 的双链紧密结合。结合后产生的荧光基团的吸收峰是 358nm 而散射峰是 461nm，正好是 UV（紫外光）的激发波长 356nm，使得 DAPI 成为了一种常用的荧光检测信号。 通过 DAPI 的染色显示其带型特征，然后根据体细胞中全套染色体形态特征和大小顺序排列，并依次配对、分 组，构成该个体的核型或染色体组型，从而可以识别和分析染色体结构和数量的异常，成为产前诊断或肿瘤细 胞遗传学的工具。 产品内容 清理液（Reagent A） 毫升 滞态液（Reagent B） 毫升 低渗液（Reagent C） 毫升 固定液 A（Reagent D） 毫升 固定液 B（Reagent E） 毫升 预备液（Reagent F） 毫升 染色液（Reagent G） 毫升 抗淬灭剂（Reagent H） 毫升 产品说明书 1 份 保存方式 保存滞态液（Reagent B）和染色液（Reagent G）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里；滞态液（Reagent B）、染色液（Reagent G）和抗淬灭剂（Reagent H），避免光照，有效保证 6 月 用户自备 胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液：用于细胞脱离 完全细胞培养液：用于细胞培养 无离子水：用于清洗染色的载玻片 50 毫升锥形离心管：用于细胞处理的容器 37℃恒温水槽：用于预热试剂溶液 台式离心机：用于沉淀细胞 小型染色缸：用于载玻片染色的容器2 载玻片：用于细胞涂片和染色 显微镜：用于观察细胞分裂和染色体组型 实验步骤 实验开始前，将试剂盒里的固定液 A（Reagent D）和 B（Reagent E）从 4℃的冰箱里取出，移取 A 液 xx 毫升 和 B 液 xx 毫升加入到 50 毫升锥形离心管，混匀后标记成为固定工作液，置入冰槽里。同时在 37℃恒温水槽里 预热清理液（Reagent A）、滞态液（Reagent B）、低渗液（Reagent C）。然后进行下列操作。 一、 限定细胞在有丝分裂中期（METAPHASE） 1）贴壁细胞处理 1． 抽去铺满生长细胞的 75cm2细胞培养瓶的培养液 2． 加入 xx 毫升 清理液（Reagent A）到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面， 3． 小心抽去清理液（Reagent A） 4． 加入 3 毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面 5． 放进 37℃培养箱孵育 3 分种 6． 手击振动培养瓶，使细胞脱落 7． 加入 15 毫升用户自备的完全细胞培养液，充分混匀 8． 移出 10 毫升混匀物到新的 75cm2细胞培养瓶 9． 加入 10 毫升用户自备的完全细胞培养液到上述新的 75cm2细胞培养瓶 10．放进 37℃细胞培养箱孵育 16 至 20 小时 11．小心抽去铺满 70％生长细胞的 75cm2细胞培养瓶的培养液 12．加入 10 毫升用户自备的完全细胞培养液 13．加入 xx 微升 37℃预热的滞态液（Reagent B），轻轻摇动细胞培养瓶，使其混匀 14．放进 37℃细胞培养箱，孵育 2 小时 15．在显微镜观察下，细胞开始收缩变圆，表明细胞处于有丝分裂 16．手击振动拍打培养瓶，使细胞脱落 17．移出含有滞态液（Reagent B）的细胞培养液到 50 毫升锥形离心管 18．加入 xx 毫升清理液（Reagent A）到培养瓶，清洗整个细胞表面 19．移出清理液合并到 50 毫升锥形离心管 20．加入 3 毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面 21．置入 37℃培养箱 3 分种 22．手击振动培养瓶，使细胞脱落 23．加入 10 毫升用户自备的完全细胞培养液，充分混匀 24．移出混匀物合并到 50 毫升锥形离心管 25．放进台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g 26．小心抽去上清液（保留 0.3 毫升） 27．手指轻弹混匀细胞 2）悬浮细胞处理 1． 准备好 108悬浮细胞（淋巴细胞、白细胞、骨髓细胞等） 2． 移入到 50 毫升锥形离心管 3． 放进台式离心机离心 5 分钟， 速度为 300g3 4． 小心抽去上清液 5． （选择步骤）加入 xx 毫升 清理液（Reagent A），混匀颗粒群 6． （选择步骤）放进台式离心机离心 5 分钟， 速度为 300g 7． （选择步骤）小心抽去清理液（Reagent A） 8． 加入 15 毫升用户自备的 RPMI 1640 完全细胞培养液，充分混匀细胞颗粒群 9． 转移到到新的 75cm2细胞培养瓶 10．放进 37℃细胞培养箱孵育 16 至 20 小时 11．移入到 50 毫升锥形离心管 12．放进台式离心机离心 5 分钟， 速度为 300g 13．小心抽去上清液 14．加入 10 毫升用户自备的 RPMI 1640 完全细胞培养液，混匀细胞颗粒群 15．加入 xx 微升 37℃预热的滞态液（Reagent B），混匀 16．放进 37℃细胞培养箱，孵育 2 小时 17．在显微镜观察下，细胞开始收缩，表明细胞处于有丝分裂 18．放进台式离心机离心 5 分钟， 速度为 300g 19．小心抽去上清液 20．加入 10 毫升用户自备的 RPMI 1640 完全细胞培养液，充分混匀 21．放进台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g 22．小心抽去上清液（保留 0.3 毫升） 23．手指轻弹混匀细胞 二．低渗处理有丝分裂细胞 1． 用滴管一滴一滴加入 xx 毫升 37℃预热的低渗液（Reagent C）到 50 毫升锥形离心管，轻轻摇动 2． 放进 37℃细胞培养箱孵育 15 分钟 3． 放进台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g 4． 小心抽去上清液（保留 0.3 毫升） 5． 手指轻弹混匀细胞 三．固定细胞 1．用滴管一滴一滴加入 xx 毫升预冷的固定工作液到 50 毫升锥形离心管，轻轻摇动 2．放进冰槽里孵育至少 5 分钟 3．放进台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g 4．小心抽去上清液（保留 0.3 毫升） 5．手指轻弹混匀细胞 6．重复上述步骤 1 至 5，直到沉淀细胞颗粒群为白色（越白越好） 7．加入 5 毫升固定工作液到 50 毫升锥形离心管，充分混匀 四．染色体载片制作 1． 先将载玻片置于冰箱里冷却，然后放在实验台上，并排放上 5 至 10 张 2． 从高达 30 至 60 厘米处向下滴上 3 滴细胞混匀液在载玻片上，立即吹散开，使其散开或然后拿起载玻片， 轻轻拍击手掌（注意：参见注意事项 8）4 3． 在显微镜下观察有丝分裂中期的细胞 4． 空气中晾干载玻片（注意：参见注意事项 8） 5． 可以保存在 70％酒精里，放进 4℃冰箱长达一年。剩下的在固定液里的细胞可以长期保存在－20℃冰箱里 五．染色 1． 加入 xx 毫升预备液（Reagent F）到小型染色缸（Coplin jar） 2． 放进晾干的载玻片孵育 30 秒 3． 取出载玻片，加上 xx 微升染色液（Reagent G），铺满整个细胞表面 4． 置入暗室 3 分钟 5． 放进含有预备液（Reagent F）的小型染色缸孵育 30 秒 6． 取出载玻片，用用户自备的无离子水轻轻冲洗 3 次 7． 在暗室里晾干 8． 加上 xx 微升抗淬灭剂（Reagent H） 9． 封片 10． 在荧光显微镜紫外波长下，观察呈现蓝色的细胞染色体 11． 将荧光图像转换为黑白图像，显示 G 带条带进行分析 注意事项 1． 本产品为 10 次（100 载玻片）的操作量 2． 操作时，须戴手套 3． 细胞培养可使用 25cm2细胞培养瓶或 100mm 细胞培养皿 4． 滞态液（Reagent B）为 100 倍浓缩 5． 使用滞态液（Reagent B）须注意操作安全，小心谨慎，如果溅于皮肤上，立即用水冲洗，并就医处理 6． 使用低渗液（Reagent C）处理细胞，切莫超过 30 分钟时间，否则将导致细胞破裂 7． 使用固定液（Reagent D 和 F）处理细胞，可以在 4℃冰箱里长达 30 分钟，甚至过夜 8． 载玻片必须非常洁净，且要冷冻后使用 9． 建议从高处滴落样品，可以使细胞染色体舒展开来，便于观察 10．上样后的载玻片可以放进 37℃培养箱里烘干 11．除了 DAPI 染色外，还有许多其它染色，例如，醋酸地衣红染色（aceto- orcein），福尔根染色（feulgen）、 嗜碱性染色（basophilic dye）包括甲苯胺蓝染色（toluidine blue）或亚甲基蓝染色（methylene blue）以及吉 姆萨染色（giemsa；G、R、C 带），喹吖因氮芥染色（quinacrine mustard；Q 带），丫啶橙染色（acridine orange； R 带）等 12．DAPI 染色人体染色体核型参考图像及其转换为黑白图像如下：13．本公司提供系列染色体染色试剂产品 质量标准 1． 本产品经鉴定性能稳定 2． 本产品经鉴定荧光清晰 友情提醒 IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
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