大鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISA试剂盒实验指导，实验咨询，售后保障

点击次数：410 发布时间：2014/6/13 17:26:54

大鼠水通道蛋白0(AQP-0)elisa试剂盒是一种利用双抗体夹心法测定标本中大鼠白介素6含量的科研试剂盒。上海百蕊生物科技有限公司专业销售 elisa检测试剂盒，质量可靠，价格低廉。我们所销售的大鼠白介素6Elisa试剂盒，具有精确度高于市场同类产品，性价比在市场上具有很强的优势，如果产品有质量问题，免费包退换。

用于ELISA测定的临床标本*为常用的是血清（浆）其次为唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。血清标本测定的标志物为传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、特种蛋白时，在处理和保存方面要考虑以下几个方面：1）要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，故在以HRP为标记酶的ELISA 测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色［1］。2）样本的采集及血清分离中要注意避免细菌污染。细菌生长分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；此外一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。3）血清标本如是以无菌操作分离，则可在2～8℃下保存1周。如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存应在- 70℃以下。4）冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。5）标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测。对用于激素和治疗药物测定的血清标本的收集，要注意收集时间对测定结果产生影响。

实验时通常将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在ELISA测定中试剂准备*关键的是，在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定。以使试剂盒在使用前与室温平衡。其目的是在后面的温育反应步骤中，使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。其次，目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制，因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。此外，当试剂盒以OPD为底物时，则底物溶液应在反应显色前临时配制。

在现在的ELISA商品试剂盒中，血清样本的加入几乎是的要使用微量加样器加入样本的步骤。使用微量加样器加样必须注意避免以下几点：加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。试剂的加入除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要。滴加太快易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。故有时一份标本用相同的试剂盒两次测定结果不同，往往是上述加样及试剂的错误所致。

温育是ELISA测定中*容易出现问题的步骤。ELISA作为一种固相免疫测定，必须在一定的温度条件下反应一定的时间，且温育所需时间与温度成负相关性。*为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。目前ELISA商品试剂盒，国产反应温育时间为37℃ 30分钟～1小时，进口试剂盒为37℃ 1～2小时才能较完全的结合。温育实际测定操作中要注意以下几点：1）要保证在设定的温度下有足够的反应时间。在临床实验室中，通有将微孔板一放入温箱即开始计时，造成实际测定中温育时间不够，弱阳性样本测不出来。南方冬季室内温度较低应特别注意，此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够，以致弱阳性样本测定为阴性［3］。为保证37℃下足够的温育时间，可自行确定本实验室不同季节（不同室温下）微孔板从室温拿至温箱所需时间孔内温度才能达到37℃，用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。2）温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中，指出温育温度可有两种。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看，在较低的温度下反应较长的时间*为完全。建议在临床ELISA测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。3）“边缘效应”的排除。“边缘效应”指外周孔显色较中心孔深，原因为96孔板周孔与中心孔表面热力学梯度不同。使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可排除“边缘效应”，且可提高测定重复性。
总而言之，尽量采用水浴，温育中让微孔板浮于水面上，或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒，放于温箱中。这样因板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触，水浴箱或湿盒内的高温度使反应溶液的温度迅速与温室平衡。