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点击次数：280 发布时间：2023/12/4 10:22:01
丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒的操作步骤
（货号：A141-1-1 Pyruvate Decarboxylase Kit，PDC 分光光度法）
一、测定原理：
PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶
（ADH）来进一步催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+；
NADH 在340nm有吸收峰，而NAD+没有；通过测定340nm
光吸收下降速率，来计算PDC 活性。
二、测定意义：
PDC主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶，催
化丙酮酸脱羧生成乙醛。
三、自备仪器或用品：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比
色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
四、试剂盒组成(50T/48 样)：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1 瓶，﹣20℃保存。
试剂五：液体×1 瓶，﹣20℃保存。
混合试剂：临用前配制，小心把试剂四和五转移到试剂三中，
充分溶解。
试剂六：液体×1 瓶，4℃保存。
五、粗酶液提取:
1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后
弃上清；按照每200 万细菌或细胞加入400μL提取
液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，工作3s，
间歇10s，工作35次），16000g 4℃离心20min，取上
清，置冰上待测。
2、组织处理：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1：5～
10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）
进行冰浴匀浆，16000g 4℃离心20min，取上清，置
冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测
六、操作步骤:
注：ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10 3L/mol/cm；
d：比色皿光径，1cm；
V 总：反应体系总体积，1mL=0.001 L；
V 样：加入反应体系中上清液体积，0.1mL；
Cpr：蛋白浓度，mg/mL（需要另外测定，建议使用本
公司BCA蛋白质含量试剂盒）；
W：样本质量，g；
V 样总：加入提取液体，1mL；
细胞数：细胞总数量，10 4个；
T：反应时间，1 min。
丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒的操作步骤
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