内毒素检测试剂盒现货供应-上海信帆
阅读次数:190 发布时间:2020/4/15 11:24:12
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内毒素检测试剂盒现货供应-上海信帆

什么是细菌内毒素?
细菌内毒素(脂多糖,LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分。人们在研究革兰氏阴性菌血症和内毒素血症的过程中,发现细菌内毒素在其中起着关键的作用,内毒素使机体免疫功能严重受损,进一步的发展可能引发脓毒性休克,弥散性血管内凝血,急性呼吸窘迫综合症,全身炎症反应综合症或致命性多器官功能衰竭。因此,内毒素的去除对于人类疾病治疗的注射型药品、生物制品等都是必须的,尤其对于基因药物、蛋白药物、单抗克隆药物、生物疫苗、小分子化学药物等生物制品的下游纯化处理来说就显得非常重要。

细菌内毒素具有很强的耐热性和化学稳定性,100℃以下无大变化,在120℃高温下加热4小时仅能破坏98%,要完全灭活需在180℃高温下,加热2小时以上,这样的方法进行内毒素去除有相当难度。一般化学药品不影响细菌内毒素的活性,只有强酸、强碱或强氧化剂可以破坏细菌内毒素。

内毒素检测试剂盒细菌内毒素去除的原理
因细菌内毒素体积小,耐热性及化学稳定性强,所以一般的过滤、加热和化学方法不易去除或灭活内毒素。现比较常用的内毒素去除方法多为超滤法或亲和层析法。本试剂盒使用的是一类内毒素去除树脂,它以生物安全性极高的内毒素特异吸附物质为配体,经此亲和树脂纯化,样品终的内毒素水平可低于0.1 EU/ml。而且经过亲和纯化后没有对人体有毒有害物质残余,适合抗体、疫苗等生物制品的内毒素去除。

内毒素检测试剂盒内毒素去除实验操作
亲和层析内毒素去除的方法操作较简单,具体操作如下:
样品处理:样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。样品PH好控制在7-8,是内毒素结合至柱子上佳pH条件。样品好控制适当的离子强度,减少非特异性吸附,如0.15-0.5M的NaCl。
活化树脂:将预装柱置于铁架台,垂直固定,去除预装柱顶部的盖子,打开流速控制器,使保护液在重力作用下流干,加入5ml再生缓冲液(预冷),调节流速控制器,保持流速在0.25ml/min(或者1滴/6s),待再生缓冲液流干,再加入5ml再生缓冲液(预冷),再重复操作两次,确保体系保持无热原存在。即使是次使用也必须进行这一步操作。这步操作大约需要60分钟完成。

平衡树脂:活化完毕,加入6ml平衡缓冲液(预冷),沿柱管内壁均匀加入其中,保证清洗柱管的内壁,调节流速控制器,保持流速在0.5ml/min(或者1滴/3s),流干平衡缓冲液,再按此操作重复两次。这步操作大约需要40分钟完成。

内毒素去除:2ml样品加到平衡后的层析柱中,调节流速在0.25ml/min(或者1滴/6s),不接收流出液。当样品流完,继续添加样品,样品可以加满柱管,同时收集流出液,即为除热原的样品。为了降低样品的损失,样品流完后,再添加2ml平衡液,并与之前的流出液合并。检测样品浓度及内毒素水平。

再次使用:如果流出样品内毒素水平未能达到预期值,需要将预装柱按照步骤2、3重新再生、平衡,然后上样纯化。

保存条件:如果预装柱用完后需要保存,先用10ml平衡缓冲液(预冷)平衡柱子,待平衡液流干,加入10ml 20%乙醇溶液并于4℃保存。

内毒素检测试剂盒内毒素去除亲和填料的注意事项:
1、内毒素去除用的亲和填料每次使用前都需用再生液和平衡液处理;
2、实验过程中使用的相关溶液和器具均要除热原,防止引入内毒素污染;
3、适当延长填料与样品溶液的处理时间可以加大内毒素的吸附量;
4、样品如果本身是带负性电荷,为增加样品回收率,样品中可以加0.2M NaCl;
5、样品pH在7-8范围内,可以提高内毒素去除效率同时减少非特异性吸附;
6、样品内毒素如果一次去除不完全,可以重复,直到合格为止;
7、亲和填料保存条件为20%乙醇,4~8℃。 

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