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供应冻干补体,可用于血清总补体溶血活性(CH50)检测

点击次数:775   发布时间:2019/4/11 16:29:03

供应冻干补体,可用于血清总补体溶血活性(CH50)检测


上海信帆生物供应冻干补体,产品规格0.5ml一只,一盒10只,备有大量库存!

使用方法:每支加0.5ml蒸馏水复溶,静置10分钟后轻轻摇匀;滴定时用缓冲生理盐水或缓冲液(不能含NaN3)做1:5-10倍稀释使用,临用现配。

稳定性:4-8℃保存3年(暗处保存)

产品规格:0.5ml/支*10

注意事项:请穿戴实验服及一次性手套操作。


血清总补体溶血活性(CH50)测定方法一、原理利用绵羊细胞与相应抗体(溶血素)结合成的复合物,可激活血清中的补体,导致红细胞溶解,当红细胞和溶血素量一定时,在规定反应的时间内,溶血程度与补体量及活性呈正相关。在接近50%溶血(CH50)时,二者之间近似直线关系,故以50%溶血作为敏感的判断终点。以引起50%溶血所需的小补体量为一个CH50U,可计算出待测血清中总的补体溶血活性,以CH50U/ml表示。

本实验主要反映补体经典活化途径的溶血功能,其结果与补体C1~C9各组成分的量及活性均有关。

二、试剂及配制

1.缓冲生理盐水:(1)贮存液:Na2HPO4.12H2O2.85gKH2PO40.27gNaCl17.00g蒸馏水定容至100ml4℃保存备用(2)应用液:5ml贮存液加95ml蒸馏水,再加10%硫酸镁0.1ml,当日配制,12小时内使用。

2.2%绵羊红细胞:无菌采取绵羊血液,于等量Alsever液中可保存3周。用前以缓冲液洗3次,并配成2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。

3.溶血素:将绵羊红细胞溶血素(效价1:4000),用应用液做1:2000倍稀释(即1ml溶血素加1999ml应用液)。

4.待测血清:新鲜血液室温放置30min,再4℃放置60min,使血收缩,4℃离心(3000r/min)10min,取上清,-20℃保存。

三、操作步骤试管法(改良Mayer法)

1.致敏羊红细胞:2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素(1:2000),混匀,置37℃水浴30min。

2.稀释血清:待测血清0.2ml,加应用液3.8ml,稀释度为1:20。

3.配制溶血标准管:全溶血管:2%绵羊红细胞2ml加8ml蒸馏水,混匀。50%溶血管:取全溶血管液2ml加缓冲液2ml。

4.按表所示,依次加各成分于试管中,混匀,置37℃水浴30min,第10管为非溶血对照:补体CH50测定试管法

5.结果测定:取出试管,2000r/min离心10min,对照管应不溶血。肉眼比色,选与50%溶血标准管相近二管,再用分光光度计测(波长542nm、0.5cm比色杯)OD值,确定与标准管接近者为终点管,然后按下公式计算CH50值:血清补体CH50(U/ml)=(1/血清用量)×稀释度。如第5管为终点管,测待测血清中CH50为66.7U/ml。血清补体CH50正常值为50-100U/ml。

红细胞、补体溶血实验系列(目录)绵羊红细胞(SRBC)鸡红细胞豚鼠红细胞兔红细胞牛红细胞猪红细胞猫红细胞犬红细胞人红细胞溶血素(绵羊红细胞溶血素:SRBC抗体)补体(冻干豚鼠血清)(可订做各种浓度)-上海信帆生物科技有限公司

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