ATP生物发光检测试剂盒( 萤火虫荧光素酶法)现货-上海信帆生物
阅读次数:254 发布时间:2019/3/19 11:31:20
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 ATP生物发光检测试剂盒( 萤火虫荧光素酶法)现货-上海信帆生物

 ATP生物发光检测试剂盒

包装规格:100T   500T


产品组成、储存、稳定性 

组成

保存

LF101-01

LF101-02

Luciferase/Luciferin substrate 50×

-20

0.2ml

1ml

L/L Dilution Buffer

-20

10ml

50ml

Lysis Buffer 5×

4

10ml

50ml

ATP Standard (1mM)

-20

0.1ml

0.1ml

储存:未打开包装前避光储存于-20℃,打开包装后根据产品说明书上的单个组分的储存条件保存。避免反复冻融以及ATP污染。

产品介绍:

利用萤火虫荧光素酶催化底物荧光素的转化,高效利用ATP的能量发射出光子。发光信号与存在的ATP量呈正比的原理进行ATP的生物发光检测。该产品可用于快速、定量测定液体样品中或细胞或组织内的ATP(adenosine 5'-triphosphate)水平。产品中的Lysis Buffer能够有效裂解细菌、细胞以及微生物样品,充分释放ATP,适用于多种样本来源的ATP检测。Luciferase/Luciferin substrate采用优化的酶反应体系,产生的荧光在一分钟内保持稳定。该产品检测灵敏度达到10-16 mol,检测范围在10-1110-16 mol之间,可用于微量ATP检测。

适用范围

可用于检测多种来源样品中细菌、细胞以及微生物的ATP,及微量ATP检测。

产品特点

1.  方便:反应试剂容易配制。

2.  检测试剂产生的荧光稳定性高,不需要快速混匀操作。

3.  快速:样品裂解在5-10分钟内完成,加入稀释后的Luciferase/Luciferin substratet即可检测。

4.  灵敏:可检测少至10-16 mol ATP

操作步骤
1. 试剂准备

1稀释Lysis Buffer:将Lysis Buffer室温溶化,用无菌水5倍稀释使用。(为避免ATP污染,请使用无菌水稀释)。置于4℃保存。

2配制Luciferase/Luciferin ReagentL/L Dilution Buffer室温溶化后,作为稀释液将Luciferase/Luciferin substrate进行50倍稀释,配制成Luciferase/Luciferin Reagent,分装后-20℃保存。测定前取出平衡至室温使用,冻融次数不超过3次。

3ATP标准品的配制:用Lysis BufferATP母液稀释至10-1210-17mol/ul的浓度,分别取10ul进行检测,制作标准曲线,即在10-1110-16mol ATP范围内制作标准曲线,呈很好的线性关系。配制方法参考下表:

管号

用量体积

稀释液(Lysis Buffer)体积

浓度(mol/ul

1

10ul母液

90ul

10-10

2

10ul1液体

90ul

10-11

3

10ul2液体

90ul

10-12

4

10ul3液体

90ul

10-13

5

10ul4液体

90ul

10-14

6

10ul5液体

90ul

10-15

7

10ul6液体

90ul

10-16

8

10ul7液体

90ul

10-17

2. 样品裂解    

贴壁细胞的裂解
吸除培养液,加入足够覆盖细胞的Lysis Buffer(如24孔细胞培养板加入150ul Lysis Buffer,可以使用移液器进行反复吹打或晃动培养板使Lysis Buffer充分接触并裂解细胞,室温静置5-10min后,吸取上清进行检测

悬浮细菌、细胞的裂解
转移悬浮液到1.5ml离心管中,离心沉淀细胞,弃上清,按照24孔板每孔的细胞量对应150μl Lysis Buffer的比例加入Lysis Buffer,移液器反复吹打几次,室温静置5-10分钟后,吸取上清进行检测。

对于悬浮样品的裂解也可以将样品充分混匀后直接吸取适量体积加入Lysis Buffer,移液器反复吹打几次,室温静置5-10分钟后进行检测。样品体积不超过Lysis Buffer1/3

植物、动物组织样品的裂解
取适量组织样品,加入适当比例的Lysis Buffer(如20mg植物组织加入500ul Lysis Buffer后用玻璃匀浆器或研钵进行匀浆。充分匀浆可以确保组织被完全裂解,离心后取上清进行检测

其它来源的ATP

对于其它有效方法如三氯乙酸法等提取的ATP样品,或游离ATP的检测,可直接稀释到检测范围后用配制好的Luciferase/Luciferin Reagent进行检测。
3. 样品测定
1ATP标准品的测定:吸取50ul配制好的Luciferase/Luciferin Reagent加入测定管中,放置2分钟以减少背景发光值,加入10ul 配制好的ATP标准品,移液器轻轻吹打几次,立即进行检测。制作标准曲线的同时设置阴性对照,即不添加ATP,直接将10ul Lysis Buffer加入50ul Luciferase/Luciferin Reagent中进行检测,测定试剂的背景发光值。如果背景发光值过高,可以将配制好的Luciferase/Luciferin Reagent放入测定管后室温放置15分钟以消耗ATP,降低背景发光值。

2)样品的测定:吸取50ul Luciferase/Luciferin Reagent加入测定管中,加入10ul 样品裂解混合液,移液器轻轻吹打几次,立即进行检测。
3制作标准曲线,根据标准曲线计算出样品中ATP的浓度。

 


1、 操作过程中需注意避免ATP污染,尤其是检测微量ATP时,配制试剂时需用无菌水,使用的吸头需灭菌,操作时戴一次性手套。

2、 Luciferase活性可被多种去污剂抑制,其*佳pH7-8之间,本试剂盒提供的裂解液用量不超过10ul时对Luciferase/Luciferin Reagent发光值没有影响,但是如果需要采用其它裂解方法提取ATP时,需考虑裂解液成分对luciferase活性的影响。

3、 配制好的Luciferase/Luciferin Reagent在室温放置6小时,4℃放置7天内发光值下降在10%之内,因此检测微量ATP时,为了降低背景发光值,可将Luciferase/Luciferin Reagent室温放置6小时内或4℃放置7天内以充分消耗ATP

  ATP生物发光检测试剂盒( 萤火虫荧光素酶法)现货-上海信帆生物

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