NAD激酶(NADK)试剂盒的测定原理和样本注意事项
阅读次数:319 发布时间:2019/2/21 11:04:46
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NAD激酶(NADK)试剂盒的测定原理和样本注意事项

NAD激酶(NADK)是目前所发现的生物体内惟一催化NAD磷酸化生成NADP的酶。生物体内的NAD和NADP至少参与300多个不同的氧化还原反应。NADH、NADPH在电子传递过程中,均会产生O2- •和H2O2,促进膜的氧化,从而加速植物的衰老。生物氧化是果实成熟衰老过程中的主要生理活动,大量研究表明,活性氧代谢失调是导致果实衰老的重要原因。据报道,草莓果实采后常温下O2- •产生速率比低温下快;其成熟衰老过程与NADK有关。


测定原理:

NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH;NADPH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT),通过在600 nm下测定MTT的还原速度(吸光值的变化)可反映出NADK活性的大小。

需要的仪器,耗材:

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

测定意义:

NADK(EC 2.7.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是目前所发现的生物体内惟一能够催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)以ATP或无机多聚磷酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应,生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及调节NAD(H)与NADP(H)的平衡上具有重要作用。测定原理:NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH;NADPH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT),通过在600 nm下测定MTT的还原速度(吸光值的变化)可反映出NADK活性的大小。需要的仪器,耗材:可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

注意事项:
1. 由于本产品需新鲜制备,在您确认订购后约8个工作日才能发货。
2. 粗酶液的每次冻融均可能会引起部分失活,所以收到酶液后请根据需要进行分装,并置于-20℃或更低温度保存。
3. 随着保存时间的延长,酶活力会有一定程度的下降,收到产品后应尽快使用。
4. 本产品在生产和保存的过程中可能会有混浊或沉淀产生,融化后混匀即可,不影响正常使用。

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