T细胞亚群检测试剂盒如何正确使用-CD3CD4CD8检测试剂盒
阅读次数:243 发布时间:2018/12/5 9:55:34
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T细胞亚群检测试剂盒如何正确使用-CD3CD4CD8检测试剂盒

上海信帆生物供应T细胞亚群检测试剂盒,可以检测CD3CD4CD8,产品质量稳定,特异性好,灵敏度高,如需了解更多详细信息,欢迎咨询我司客服人员。

T细胞是一个不均一的细胞群体,分类方法有多种.按细胞表面分化抗原(CD)的不同,可分为CD4+和CD8+两大亚群;按T细胞表面受体(TCR)的不同,可分为αβT细胞γδT细胞;按功能可分为辅助性T细胞(Th 细胞)、抑制性T细胞(Ts细胞)、细胞毒T细胞(CTL或Tc细胞)和迟发型超敏反应T细胞(TDTH细胞);按对抗原应答的不同,分为初始T细胞(naive T cell)、活化的T细胞(activated T cell)和记忆性T细胞(memory T cell);以及区别于传统T细胞的NKT细胞等等!


试剂盒操作如下:

T 细胞亚群检测试剂盒说明书
一:试剂盒组成:

1. 防脱片剂2ml
2. 固定液10ml
3. A 小鼠抗人CD3 单抗1ml
B 小鼠抗人CD4 单抗1ml
C 小鼠抗人CD8 单抗1ml
4. 生物素标记羊抗小鼠IgG( IgG/Bio) 1.5ml × 2
5. 碱性磷酸酶标记链霉卵白素(S-A/AP) 1.5ml × 2
6. A 底物增强剂( 40×) 200μl
B 底物液( 40× ) 200μl
C 底物缓冲液( 10× ) 800μl
7. 细胞核复染液5ml
8. 封片剂1ml
9. 记号笔1 支
10. PBS 2 包(1000ml)
二:标本制备:
取肝素抗凝(25μl/ml)的静脉血1~2ml,PBS 稀释1-2 倍后,沿装有等量淋巴细
胞分离液的试管壁混匀缓慢加至液面上层,保持两种液体界面清晰,离心(2000
转/分)15-20 分钟,吸取两液面交界处的单个核细胞层,加5 倍PBS,离心(1000
转/分)5 分钟,弃上清液,沉淀即为单个核细胞。利用试管中剩余的少许回流
液体(约一滴)混匀细胞,制成单个核细胞悬液。滴30μl 细胞悬液于载玻片上,
静置2 分钟使细胞下沉粘附于玻片上,吸去液体,快速吹干或37℃温箱1 小时
烤干。或用PBS 将单个核细胞调至2×105 个/ml,离心涂片机1000 转离心1-2
分钟制片,快速吹干或37℃温箱1 小时烤干。涂片前取防脱片剂5-10μl 均匀推
片,亦可用棉签粘取防脱片剂均匀涂于干净玻片上,待干后制备细胞涂片,以防
掉片。
三:显色剂的配制:
分别取A 液25ul,B 液25ul 置于干净试管中混匀,室温放置2-5 分钟,加1ml
蒸馏水,混匀,再加C 液100ul 待用。
*使用前,根据所需显色剂用量,按照以上比例现配现用。
四:标本染色:
1. 充分干燥(室温2 小时以上或过夜)的细胞涂片先用记号笔在标本外画圈,
然后滴加固定液50μl,室温静置2-3 分钟,用PBS 淋洗,擦干玻片背面及细胞
外的PBS。

上海信帆生物科技有限公司
*以下反应均需在湿盒中进行。
2. 分别滴加抗人CD3、CD4、CD8 单抗适量(10-30μl), 4℃过夜,PBS 淋洗3
次。
3. 滴加生物素标记抗小鼠IgG 适量(10-30μl),37℃孵育30-45 分钟,PBS 淋
洗3 次。
4. 滴加碱性磷酸酶标记链霉卵白素适量(10-30μl)37℃孵育30-45 分钟,PBS
淋洗3 次。
5. 滴加显色剂30-50μl,室温显色20-40 分钟。可在显微镜下观察,待细胞膜上
出现红色标记物时,用PBS 淋洗。
6. 滴加细胞核复染液30-50μl,30 秒后自来水淋洗。
7. 滴加封片剂,盖片封片,镜检。如不需保存亦可用水替代封片剂盖片镜检。
五:观察:
高倍镜下选取染色好的视野记数100-200 个单个核细胞,细胞表面有红色标记物
为阳性细胞。算出阳性率。
六:正常参考值:
正常人外周血中,阳性细胞百分率一般在:CD3,60-80%;CD4,35-55%;CD8,
20-30%;CD4/CD8 的比值在1.5-2.0 范围内。

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