T细胞亚群检测试剂盒如何正确使用-CD3CD4CD8检测试剂盒

点击次数：814 发布时间：2018/12/5 9:55:34

T细胞亚群检测试剂盒如何正确使用-CD3CD4CD8检测试剂盒

上海信帆生物供应T细胞亚群检测试剂盒，可以检测CD3CD4CD8，产品质量稳定，特异性好，灵敏度高，如需了解更多详细信息，欢迎咨询我司客服人员。

T细胞是一个不均一的细胞群体,分类方法有多种.按细胞表面分化抗原(CD)的不同,可分为CD4+和CD8+两大亚群;按T细胞表面受体(TCR)的不同,可分为αβT细胞γδT细胞;按功能可分为辅助性T细胞(Th 细胞)、抑制性T细胞(Ts细胞)、细胞毒T细胞(CTL或Tc细胞)和迟发型超敏反应T细胞(TDTH细胞);按对抗原应答的不同,分为初始T细胞(naive T cell)、活化的T细胞(activated T cell)和记忆性T细胞(memory T cell);以及区别于传统T细胞的NKT细胞等等！

试剂盒操作如下：

T 细胞亚群检测试剂盒说明书
一：试剂盒组成：

1. 防脱片剂2ml
2. 固定液10ml
3. A 小鼠抗人CD3 单抗1ml
B 小鼠抗人CD4 单抗1ml
C 小鼠抗人CD8 单抗1ml
4. 生物素标记羊抗小鼠IgG（ IgG/Bio） 1.5ml × 2
5. 碱性磷酸酶标记链霉卵白素(S-A/AP) 1.5ml × 2
6. A 底物增强剂（ 40×) 200μl
B 底物液（ 40× ) 200μl
C 底物缓冲液（ 10× ) 800μl
7. 细胞核复染液5ml
8. 封片剂1ml
9. 记号笔1 支
10. PBS 2 包(1000ml)
二：标本制备：
取肝素抗凝（25μl/ml）的静脉血1~2ml，PBS 稀释1-2 倍后，沿装有等量淋巴细
胞分离液的试管壁混匀缓慢加至液面上层，保持两种液体界面清晰，离心（2000
转/分）15-20 分钟，吸取两液面交界处的单个核细胞层，加5 倍PBS，离心（1000
转/分）5 分钟，弃上清液，沉淀即为单个核细胞。利用试管中剩余的少许回流
液体（约一滴）混匀细胞，制成单个核细胞悬液。滴30μl 细胞悬液于载玻片上，
静置2 分钟使细胞下沉粘附于玻片上，吸去液体，快速吹干或37℃温箱1 小时
烤干。或用PBS 将单个核细胞调至2×105 个/ml，离心涂片机1000 转离心1-2
分钟制片，快速吹干或37℃温箱1 小时烤干。涂片前取防脱片剂5-10μl 均匀推
片，亦可用棉签粘取防脱片剂均匀涂于干净玻片上，待干后制备细胞涂片，以防
掉片。
三：显色剂的配制：
分别取A 液25ul，B 液25ul 置于干净试管中混匀，室温放置2-5 分钟，加1ml
蒸馏水，混匀，再加C 液100ul 待用。
*使用前，根据所需显色剂用量，按照以上比例现配现用。
四：标本染色：
1. 充分干燥（室温2 小时以上或过夜）的细胞涂片先用记号笔在标本外画圈，
然后滴加固定液50μl，室温静置2-3 分钟，用PBS 淋洗，擦干玻片背面及细胞
外的PBS。

上海信帆生物科技有限公司
*以下反应均需在湿盒中进行。
2. 分别滴加抗人CD3、CD4、CD8 单抗适量（10-30μl）， 4℃过夜，PBS 淋洗3
次。
3. 滴加生物素标记抗小鼠IgG 适量（10-30μl），37℃孵育30-45 分钟，PBS 淋
洗3 次。
4. 滴加碱性磷酸酶标记链霉卵白素适量（10-30μl）37℃孵育30-45 分钟，PBS
淋洗3 次。
5. 滴加显色剂30-50μl，室温显色20-40 分钟。可在显微镜下观察，待细胞膜上
出现红色标记物时，用PBS 淋洗。
6. 滴加细胞核复染液30-50μl，30 秒后自来水淋洗。
7. 滴加封片剂，盖片封片，镜检。如不需保存亦可用水替代封片剂盖片镜检。
五：观察：
高倍镜下选取染色好的视野记数100-200 个单个核细胞，细胞表面有红色标记物
为阳性细胞。算出阳性率。
六：正常参考值：
正常人外周血中，阳性细胞百分率一般在：CD3，60-80%；CD4，35-55%；CD8，
20-30%；CD4/CD8 的比值在1.5-2.0 范围内。