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点击次数:2173 发布时间:2018/8/31 10:14:30
GoldView核酸染料原理,GoldView使用方法,GoldView注意事项
GoldView核酸染料原理
GoldView是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,采用琼脂糖电泳检测DNA时,GoldViewTM与核酸结合后能产生很强的荧光信号,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,而单链DNA呈红色荧光。GoldView不仅能染DNA,也可用于染RNA。
通过Ames实验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验,致突变性结果均为阴性;而溴化乙锭(EB)是一种强致癌剂。因此用GoldviewTM代替EB不失为一种明智的选择。
GoldView核酸染料使用方法
1. 将100ml琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8%~2%)在微波炉中融化。
2. 加入5μl GoldView,轻轻摇匀,避免产生气泡。
3. 冷却至不烫手时倒胶,待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。
4. 电泳完毕在紫外灯下观察。若使用数码相机照像记录,则关闭相机的闪光灯,放在自动档即可;若使用凝胶成像系统照相,通过调节光圈、曝光时间,选择合适的滤光片,可得到成像清晰、背景较低的照片。
GoldView核酸染料注意事项
1. 胶厚度不宜超过0.5cm,胶太厚会影响检测的灵敏度。
2. 加入GoldView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响,但不明显。
3. 通过凝胶电泳回收DNA片段时,建议使用GoldView染色,在自然光下切割DNA条带,避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤,可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。
4. 虽然未发现GoldView有致癌作用,但对皮肤、眼睛会有一定的刺激,操作时应戴上手套。
电泳结果显示GV灵敏度与EB相当
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