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点击次数：701 发布时间：2015/4/8 11:57:29
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脑出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)以其高致死率和致残率而成为严重威胁人类生命健康的重症疾病，对其发病机制及治疗方法的研究成为当前热点，但这首先依赖于稳定的脑出血模型的建立。脑出血后存在炎症反应，且较非出血性损伤更加明显。炎症反应参与了脑组织损伤及脑水肿的形成。细胞因子(Cytokine)白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）是一种重要的前炎症因子，其可通过增强中性粒细胞的毒性，促进内皮细胞表达细胞间黏附分子（Intercellular adhesion molecule,ICAM），诱使化学趋化因子升高，使更多的炎性细胞募集到病灶部位，从而加剧炎症反应，则IL-6有可能通过介导炎症反应而参与了脑出血后急性期的继发性神经元损伤及脑水肿。
本研究拟通过对脑出血不同时间点脑组织表达IL-6的观察，探讨IL-6表达在脑出血后继发性脑损伤及脑水肿中的作用。方法：利用立体定向技术建立尾状核不抗凝自体动脉血脑出血模型（50μl中等量脑出血），并在脑出血后6小时、24小时、48小时、72小时对样本进行行为学评分，包括Longa评分法（Longa Score）、肢体对称试验评分法(Footfault Asymmetry Score)、Berderson评分法(Berderson Score)、平衡木评分法(Balance Beam Score)。之后动脉取血，静置离心后留取血清，分装入－20℃冰箱保存待测。取血后，用干湿重法测相应时间点的脑组织含水量；假手术组只进针不注血，余操作同脑出血组。采用免疫组化方法观察出血后6小时、24小时、48小时、72小时脑组织的IL-6表达情况；探讨其表达规律及分布特点；常规HE染色观察脑组织的病理改变，观察基底节区域的血肿及其周围的水肿带，神经元和胶质细胞的改变；通过Nissl染色法对相应时间点血肿周围（包括水肿区域）及海马两个部位未受损的神经元进行计数，了解神经元受损情况；并用双抗体夹心酶联免疫吸附实验-ELISA试剂盒检测不同时间点血清中IL-6的水平，了解外周血中IL-6的表达情况。
结果：①脑出血后在不同时间点出现行为学异常，其中6小时与对照组相比无显著统计学差异，考虑为麻醉药品和手术创伤所致；24小时～72小时行为学异常与对照组相比有显著意义，提示行为学异常与脑损害程度一致。②脑组织含水量在6小时，实验组与对照组无差别，实验组24小时脑含水量开始升高，48小时达到高峰，持续升高到72小时,与对照组相比有统计学意义；p＜0.05；且血肿同侧与对侧脑组织含水量也有差别，血肿同侧脑组织含水量高于血肿对侧脑组织含水量；实验组24小时、48小时、72小时与6小时之间有统计学差别，对照组各时间点之间无统计学差别。③免疫组化结果为阳性面积比在脑出血组6小时为9.8±4.6(均数±标准差)，假手术组为5.0±1.58, p＝0.05，没有显著差别；脑出血组24小时为11.0±4.30,假手术组24小时为5.6±1.95, p＝0.03,有统计学意义；脑出血组48小时为19.6±2.30,对照组为6.2±1.30, p＝0.001,有显著差别；脑出血组72小时为17.0±5.15,对照组为5.8±1.92, p＝0.002,有显著统计学意义。该结果显示脑组织表达IL-6于24小时开始升高，也于48小时达到高峰，持续升高到72小时；实验组48小时和72小时与6小时和24小时之间有统计学差别，对照组各时间点之间无统计学差别，p＞0.05。④血肿周围（包括水肿区域）及海马的未受损神经元数于24小时开始减少（分别为38.4±8.17和44.4±4.77）,72小时未受损神经元数*少，达到高峰（分别为24.8±2.15和31.2±3.35），与对照组相比有显著统计学差异，p＜0.05；实验组48小时和72小时与6小时和24小时之间有统计学差别，对照组各时间点之间无统计学差别，p＞0.05。⑤脑出血血清IL-6水平于6小时开始升高（15.49pg/ml），24小时达到高峰（17.38 pg/ml），且较对照组相比（分别为10.72 pg/ml和12.30 pg/ml）有显著统计学意义，p＜0.05。随后开始下降，至72小时与对照组相比无统计学差异。结论：实验性自体尾动脉血脑出血模型脑组织表达的IL-6高峰与外周血清的高峰不一致，IL-6主要由脑组织自身表达而发挥作用；高表达的IL-6通过介导强烈的炎症反应参与了出血后急性期的继发性神经元损伤以及脑水肿形成。
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