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人全血单个核细胞分离液使用说明

点击次数:6237   发布时间:2024/5/24 9:54:36

 人全血单个核细胞分离液使用说明

 

产品说明:

本产品是一种用于分离人外周血单个核细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。外 周血中单个核细胞(PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同,红细胞和粒细胞密度较大,为 1.090 g/mL 左右,淋巴细胞和单核细胞密度为 1.075~1.090 g/mL,血小板为 1.030~1.035 g/mL。为此利用一种密度介于 1.0751.092 之间而近于等渗的溶液做密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。

 

产品指标:

密度 1.077±0.001g/mL

渗透压 290~350 mOsm/kg H2O

无菌 0.1μm 滤膜过滤。

 

操作步骤:

1. 取新鲜抗凝全血(EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可)或者去纤维蛋白血液,用等体积的全血及组织稀释液或者 PBS 稀释全血。

2. 在离心管中加入适量分离液(当稀释后血液体积小于 3mL 时,加入 3mL 分离液;大于等于3mL,加入等体积分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二,否则会影响分离效果),将稀释后的血液平铺到分离液液面上方,注意保持两液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后将血液小心的平铺于分离液上,因为两者的密度差异,将形成明显的分层界面。如果样品较多加样时间较长,在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。)

3. 室温,水平转子 500~1000g,离心 20~30min(血液的体积越大所需的离心力越大,离心时间越长,*-大的分离条件需摸索,离心转速*-大不

超过 1200g)。

4. 离心后将出现明显的分层:*上层是稀释的血浆层,中间是透明的分离液层,血浆与分离液之间的白膜层即为单个核细胞层,离心管底部是红细胞与粒细胞。

5. 小心的吸取白膜层细胞到 15mL 洁净的离心管中, 10mL PBS 或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g,离心 10min

6. 弃上清,5mL  PBS 或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心 10min

7. 重复步骤6

8. 弃上清,细胞重悬备用。

原创作者:上海信帆生物科技有限公司

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